投稿者: 液体培養を使用して菌類栽培の取り組みを強化することは、キノコ栽培のスキルを向上させ、収量を増やすための最良の方法です。
液体培養 (LC) は、菌類の培養作業を大幅に強化する手段を提供します。これは液体培地に懸濁された真菌の菌糸体で構成されており、胞子や定着した寒天から始めるよりも早く定着を促進できます。この簡単なハックは、キノコ栽培用の菌類バイオマスを拡大する最も効率的な方法です。キノコ栽培の旅の新たなレベルの可能性を解き放ちながら、お金を節約できます。費用対効果が高く、非常に拡張性が高く、少量の LC で大きな効果を発揮します。
液体培養シリンジを使用すると、キノコの栽培を簡単に始めることができ、プロセスの最もデリケートな部分を省略して栽培に集中できます。 LC のもう 1 つの重要な利点は、屋外で簡単にストレスなく接種できることです。これにより、より専門的な機器の必要性が回避され、寒天作業よりも簡単になります。 LC の作成は別の問題ですが、これを行う手順の概要は次のガイドで説明されています。
液体培養とは何ですか?
液体培養 (LC) は、滅菌された砂糖水で構成され、菌糸体または胞子を接種して、液体増殖培地またはブロスに懸濁された菌糸体を生成します。これは、穀物などの基質への接種に使用できます。糖分4%の水を含む傾向があり、糖源としては麦芽エキス、コーンシロップ、ブドウ糖、蜂蜜などが挙げられます（糖分がこれより多いと菌糸体の成長を妨げる可能性があります）。
液体培養を使用して接種を行う場合は（適切な衛生的な接種手順が実施されている）無菌環境は必要ありませんが、LCの作成にはグローブボックスや層流フードの使用など、無菌環境が必要になります。ただし、一度きれいな LC 培養物が確認されれば、屋外の非無菌環境でも汚染の危険を冒すことなく、ストレスなく簡単に接種を行うことができます。液体培養ジャーには、微細ミクロンのフィルターパッチと自己修復注入ポートを備えた特別な蓋が必要です。これにより、汚染物質の侵入を防ぎながら成長する菌糸体が呼吸できるようになり、同時に LC を簡単に移すことができます。
液体培養の利点
液体培養は、胞子や寒天培地を接種するよりも予測可能な結果と迅速なコロニー形成をもたらします。 LC での接種は寒天での接種よりも簡単ですが、寒天は初心者にとって圧倒される可能性があるより複雑なプロセスです。
液体培養は成長する菌糸体で構成されているため、発芽に時間がかかる可能性がある胞子を使用して最初から始めるのと比較して、成長時間を短縮できます。 LC を使用すると、真菌の増殖に本格的に取り組むことができ、培養時間の短縮に役立ちます。
独自の液体培養物を作成する方法を学ぶことは、接種のためにほぼ同じ数の胞子シリンジや寒天プレートを購入したり作成したりする必要がなくなることを意味します。基本的な成分により生産コストが低く、費用対効果が高く、非常に拡張性が高い（特に大規模栽培に適しています）。
LC の拡張は非常に簡単で、LC を作成するとキノコ栽培の初期段階を簡素化できます。液体培養は、菌糸体が本来持つ無限の成長能力と拡大能力を利用し、菌類培養のために菌糸体を増殖させる便利で効率的な方法となります。少量の LC も大いに役立ち、穀物瓶に接種するには 1.5 ミリリットルの LC で十分なので、1 つの 300 ml 瓶の LC で最低 200 粒の瓶に接種できる可能性があります。液体培養技術を習得すれば、さまざまな種類の菌類の培養にも応用できます。
LC を使用するもう 1 つの重要な利点は、穀物の接種をキッチン カウンターなどの屋外の表面で実行できるため、静止空気ボックス (SAB)、グローブ ボックス、層流フードなどの特殊な機器が必要ないことです。ただし、LCは別の話です）。これは、LC のきれいな培養物が一度調製されれば、実行時に正しい無菌手順に従えば汚染のリスクが非常に低いことを意味します。予防接種。
液体培養の欠点
液体培養物の接種は屋外環境で実行できますが、独自の液体培養物を作成するには、汚染に敏感であるため、SAB、グローブボックス、または層流フードによって提供される無菌環境にアクセスする必要があります。 これに慣れていない場合は、自信を持ってクリーンな LC を生産できるようになるまでに、おそらく試行錯誤が必要になるでしょう。しかし、これらの最初の努力は、忍耐強く粘り強い栽培者にとって実を結ぶでしょう。 LC を初めて使用する場合は、LC のシリンジを購入して自分で拡張すると、この課題を回避できます。
液体培養の欠点の 1 つは、寒天とは著しく対照的に、汚染されているだけでなく、汚染されていることが明らかになる (その後対処できる) のですが、汚染が懸濁液中に隠れている可能性があるため、汚染されているかどうかを判断するのが難しいことです。ただし、寒天を使用して LC の汚染をテストすることはできます。
液体培養と胞子シリンジの違いは何ですか?
液体培養の注射器には生きた菌糸体が保管されており、菌糸体は成長し、今にも消え去ろうとしているため、培養プロジェクトを本格的に開始することができます。対照的に、胞子シリンジを使用する場合は、菌糸体が成長し始める前に胞子が発芽する必要があるため、プロジェクトの成長にさらに時間がかかります。 1 つの胞子シリンジは 5 ～ 6 個の穀物瓶に接種するのに十分なだけですが、液体培養の 1 つの瓶は数百の穀物瓶に接種できます。ただし、胞子シリンジを使用して液体培養物に接種することはできます。
液体培養と寒天の違いは何ですか?
寒天は海藻由来のゼラチン状物質で、胞子の発芽や菌糸体培養の拡大と保存に一般的に使用される培地です。寒天を使用した接種には、少なくとも良質の SAB、グローブ ボックス、層流フードなどの半滅菌環境が必要です。寒天はまた、菌糸の成長をより良く観察できる固体表面を提供し、菌株選択作業の味方となります。また、寒天を使用すると液体培養よりも汚染物質の発見がはるかに簡単になりますが、寒天を接種すると胞子が発生し、コロニーが形成された寒天を穀物瓶に接種するには無菌条件と特殊な装置が必要になりますが、LC による接種では必要ありません。
始めるために必要な備品
独自の液体培養物の生産を開始するには、まず必要なものを調達する必要があります。これらには次のものが含まれます。
- 15PSIで調理できる圧力鍋。
瓶 (500 ml のキルナーまたはボール保存瓶が適していますが、古いピクルス瓶も再利用できます)。
10/20mlルアーロックシリンジ
18ゲージルアーロックシリンジ針
クリア RTV シリコーン
合成フィルターディスク
ライトモルトエキス粉末
カロコーンシロップ
懐中電灯ライター (理想的には他のライターでも使用できます)
イソプロピルアルコール 70%
目盛（0.01g単位）
ガラス、大理石、ボールベアリングの破片
瓶の蓋を修正するには、ハンマーとドライバー、または鋭い 1/4 インチの金属ドリルビットを備えたドリルが必要です。独自の LC を作成したい場合は、優れた静止エア ボックス (SAB) またはグローブ ボックスが必要になります。胞子から独自の LC を作成するには寒天も必要です。これらのアイテムはすべてオンラインで調達できます。穀物の接種には、より大きなクォート瓶が必要になります。
接種用の液体培養ジャーの作成
液体培養を使用するには、LC とそれを接種する穀物を入れる瓶の蓋を変更する必要があります。これらの液体培養ジャーには、微粒子フィルター パッチに加えて自己修復注入ポートを備えた特別なフィルター蓋が必要です。これにより、汚染物質の侵入を防ぎながら成長する菌糸体が呼吸できるようになり、LC の移送が容易になり、繰り返し行うことができます。屋外での汚染を防ぐ方法。
フィルター蓋の作成
滅菌液体培養シリンジが自己修復注入ポートを備えたフィルター蓋を巧みに使用している場合、フロー フードやグローブ ボックスは不要です。これらの蓋の作成は簡単で、ツールや消耗品はオンラインまたは一般的な金物店で簡単に入手でき、耐久性があり再利用可能な蓋を 1 回のセッションで数十個作成できます。通常の口または広口のガラス製缶詰瓶に蓋が取り付けられ、最終的なインキュベーション容器として機能します。
自己修復シリコン注入ポートを備えたフィルター蓋の作成は、液体培養物の製造、拡張、およびその後の穀物瓶への接種を行うために不可欠です。一部の培養機では、液体培養ジャーのガス交換に 13 mm (孔径 0.22 um) シリンジ フィルターを使用することに成功しています。これは、液体ではなく気体はフィルター膜を通過できるためです。これにより、瓶を振って菌糸体を分散させ、注射針を詰まらせる塊の形成を防ぐことができます。しかし、一部の栽培者（私も含めて）は、シリンジフィルターを備えた瓶から菌糸体を取り込もうとしたときに、真空ロックの問題を経験しました。シリンジフィルターを微細なミクロンの合成フィルターディスク（この目的のためにオンラインで販売されています）の小さなディスクと交換すると、これらの圧力ロックの問題を解決できます。穀物瓶の場合、圧縮/強化フェルト (「EZ-Felt」) またはタイベックも穀物スポーン瓶の蓋のフィルター素材として使用できます。
液体培養蓋のチュートリアル:
新しい金属製の缶詰瓶の蓋を選択してください。最初のタスクは、蓋に 2 つの穴を開けることです。ここには 3 つのオプションがあります。
- 蓋が瓶の所定の位置にねじ込まれている状態で、ハンマーとドライバー（穴を開けたい位置に垂直に置きます）を使用して、蓋に 2 つの穴を開けます。
- 小さなパンチとダイのセット (最大 1/4 インチまで) を使用して、瓶の蓋に 2 つの穴を開けます。
- 木製ブロックの上に蓋を置き、高速ドリルと鋭い1/4インチの金属ドリルビットを使用して2つの穴を開けます。最初にドリルビットを向けるために、パンチで小さなくぼみを付けることができます。ドリルビットが引っかかり、蓋が回転して手を切る可能性があるため、十分に注意してゆっくりと開始してください。バラのつぼみまたは鋭利なカッターナイフを使用してバリを取り除きます。瓶に金属ではなくプラスチックの蓋を使用している場合は、ドリルで軽く圧力を加えてください。そうしないと、蓋が割れる危険があります。
透明な高温 RTV ガスケットメーカー シリコーンを使用して注入ポートを作成し、フィルター パッチを固定します (注入ポートの作成に透明なシリコーンを使用すると、接種が容易になります)。シリコンを使用する場合はベタベタするので、キッチンタオルを敷くのが賢明です。シリコンの密着性を確保するために、蓋を 70% イソプロピル アルコールで拭きます。アルコールが蒸発したら、RTV シリコーンの塊を穴の 1 つに置きます。注入ポートを作成するには、蓋を裏返し、反対側でも同じプロセスを繰り返し、穴を通して互いに接する 2 つの塊を作成します。
フィルターディスクの場合は、フィルターディスク素材上に、コインなどの小さな円形のものの周りをペンでなぞり、切り取ります。このディスクの外周にシリコンを塗布し、蓋のもう一方の穴にしっかりと押し付けます。次に、蓋の表面にあるフィルター ディスクの外周にシリコンを塗布するステップを繰り返し、シリコンがディスクの外縁全体を覆うようにします。蓋を裏返し、余分なシリコンがディスクの下側をふさがないことを確認します（これはメスの刃や金属製のヘアクリップなどの細いもので取り除くことができます）。蓋を 24 時間硬化させます。その後、滅菌の準備が整います。
液体培養物の作り方（レシピと手順）
LCレシピ
LC ジャーの蓋を準備したら、LC 自体の準備に進むことができます。開始するために液体培養の注射器を受け取った場合、最初の話はこれを拡張することです。これは 500 ml の瓶 (500 ml パイントの瓶あたり 300 ml の液体が適量) の液体培養のレシピですが、必要に応じて簡単にスケールアップできます。合成フィルターディスク素材が濡れないようにするため、LC を旋回させるために、ジャーに 3 分の 2 を超えて中身を入れないでください (撥水性のものもあるため、これは問題にならない可能性があります)。 500 ml パイント瓶あたり 300 ml の液体が適量です。密閉して滅菌する前に、ガラス、ボールベアリング、または大理石の破片を瓶に数個入れて、注射器で抽出する前に菌糸体を撹拌して破壊します (これは、LC 溶液を接種するときに寒天ウェッジを砕くのに役立ち、コロニー形成にも役立ちます) 。一部の栽培者はこの目的でマグネティックスターラーを使用していましたが、これらのアイテムを使用すると、実行可能な低コストの代替手段が得られます。
LC レシピにはさまざまなものがありますが、これは信頼できるものです。ライトモルトエキスは、その栄養素プロフィールと殺菌後の透明さのために好まれています。可能であれば、LC 栄養溶液を作成するときは濾過水または蒸留水を使用するようにしてください。一部の生産者は水道水を問題なく使用していると報告していますが、菌糸体はそこに含まれる塩素をあまり好みません。必要な材料はすべて食料品店またはオンラインで入手できます。成分が完全に溶けるまで、以下のものをコンロ上の鍋で加熱してかき混ぜます。
– 水300ml
– ライトカロコーンシロップ 6 ml
– 0.6 gのエクストラライトドライモルトエキス
より大きなバッチを作成する場合は、1 g のライトモルト エクストラクト (または小さじ 6 杯 / 約 24 ml の蜂蜜) を 600 ml の水に加えることができます。空の注射器はコーンシロップを計量するのに役立ちますが、麦芽エキスを計量するにはスケールが必要です。モルトエキスは、乾燥剤パックとともに密閉した瓶に保管する必要があります。そうしないと、湿気を含んで固まり、使いにくくなる可能性があります。
競合する細菌や真菌の増殖を防ぐために、すべての栄養基質 (液体培養物、穀粒種菌、寒天など) を接種前に滅菌する必要があります。加圧滅菌は、圧力鍋を使用して高圧で長時間蒸気加熱することにより、真菌の胞子と細菌の内生胞子を破壊します。 15 PSI で 121℃ の温度を維持することが可能で、あらゆる潜在的な汚染物質を迅速に破壊します。加圧滅菌は迅速かつ便利であり、基質の同日接種が可能であり、正しい手順に従えば完全な滅菌が保証されます。
LC ジャーを圧力鍋で滅菌します（圧力に達したら 15 PSI で 30 分間）。冷却時に収縮するため、瓶の蓋を締めすぎないでください。圧力調理時間を超えないようにしてください。砂糖を加熱しすぎると砂糖がカラメル化して菌糸体の成長に悪影響を及ぼします（LC はカラメル化の結果、より琥珀色になります。理想的には、こうあるべきです）圧力鍋から出るときと同じ色になります）
瓶が完全に冷めるまで待ってから接種するか、圧力鍋を一晩冷ましてください。瓶が冷めたら、蓋と瓶の間の瓶の蓋の周囲にセロテープを貼ります（追加の予防策として、虫の侵入を許可します）。液体培養物の 300 ml 瓶は、少なくとも 150 個の穀物瓶に接種できます。室温で完全に定着したら、LC ジャーを冷蔵庫に保管します。最長 2 年間は生存可能です。
LC をゼロから作成 – 液体培養液に寒天を接種
寒天を接種して LC を作成する場合、既製の LC を接種する場合よりも汚染の影響を受けやすいため、無菌手順には特別な注意を払う必要があります。これには、作業スペース、手と腕、すべての道具、寒天容器、液体培養ジャーをイソプロピル アルコールで消毒することが含まれます。サージカルマスクを着用することは良い考えです。これは、グローブ ボックスまたは良好な静止空気ボックス (最低限) 内、または層流フードの前で行う必要があります。
上記の情報を使用して寒天を作成し、胞子を接種した後、寒天上で汚染のない健全な菌糸体培養が観察されるまで待ちます。メスや接種器具の先端が赤く光るまで火炎滅菌します。寒天に触れるとすぐに冷えるので、冷めるまで待つ必要はありません。菌糸体の先端の外側から清潔で純白の領域を選択します。コロニー形成の速度を高めるために、いくつかのカットを作成し、いくつかのウェッジを移動することができます。非常に迅速に作業し、液体培養の蓋を開け、ジャーの縁にメスを軽くたたき、寒天ウェッジを液体の中に叩き込みます。すぐに蓋を閉めてください。種/日付のラベルを付けて（油性マーカーがこれに適しており、IPAで剥がすことができます）、室温または70〜80°Fでインキュベートします。
LCの使い方 – 接種の実施
改造した瓶に滅菌した栄養液を入れたら、接種を実行できます。覚えておくべき簡単な点は、LC を取り込みまたは注入するために注入ポートを介してジャーの内部と接触する注射器および注射針は滅菌しなければならないということです。これは、圧力調理シリンジと針の組み合わせ、綿棒 (70% イソプロピル アルコールによる) の使用、および接種直前にシリンジ針を燃やすことで実現できます。自己修復注入ポート蓋を使用する利点は、フロー フードやグローブ ボックスを使用せずに、液体培養物と種菌の両方の無菌接種が可能になることです。注入ポートは 70% IPA で簡単に拭き取られ、滅菌液体培養シリンジ針で注入されます。 18 ゲージの針を備えた 10 ～ 20 ml のルアーロック シリンジはうまく機能し、滅菌して繰り返し再利用できます。これらの針は、LC の取り込みと注入を可能にするのに十分な幅を持っていますが、繰り返し使用することで注入ポートを損傷するほど大きくはありません。
接種を行う場合、汚染の可能性を最小限に抑えるために、無菌技術を維持することが不可欠です。空気の流れと空気中の汚染物質を最小限に抑えるために、屋内で作業し、窓やドアを閉めるのが最善です。手と腕はよく洗い、衣服は清潔でなければなりません。サージカルマスクを着用することは良い考えです。 70% IPA で表面を拭き、作業エリアを消毒することをお勧めします。使い捨てニトリル手袋の使用を推奨する人もいますが、70% IPA を使用して手と腕を消毒する場合は、必要ない可能性があります (このプロセスは必要に応じて繰り返すことができます)。
使用済みのルアーロックシリンジと針は滅菌して繰り返し使用できます。注射器（針が付いているもの）を広口クォートサイズの缶詰瓶に入れ、底に大さじ1杯ほどの水を入れます（空熱を防ぐため）。穀物用の蓋とアルミホイルで覆い、圧力鍋/缶詰器で 15 PSI で 20 分間滅菌します。シリンジは清潔で、必要なときにいつでも培養液を取り出すことができます。また、シリンジの材質は熱を保持しないため、圧力鍋から取り出したばかりの状態で使用することもできます。
胞子シリンジを使用した液体培養の接種
胞子シリンジを使用して液体培養物に接種できます。胞子シリンジをよく振って胞子が十分に分布していることを確認し、無菌接種手順に従い、注入ポートを介して液体培養ジャーに胞子溶液 1 ml を注入します。胞子を注入する前後に、注射針が綿棒で拭かれて火が付いていること、および注入ポートが綿棒で拭かれていることを確認してください。
液体培養シリンジを使用した液体培養の接種
将来の使用に備えて液体培養物を保存するには、液体培養シリンジから拡張するために新しい液体培養ジャーを作成することをお勧めします。これにより、今後数十回の接種が可能になり、新しい液体培養シリンジの作成が可能になります。瓶が空に近づいたら、新しい瓶を作成し、古い液体培養液を数滴、新しく準備した瓶に移します。
LC のシリンジを購入した場合は、内部の内容物には汚染物質が含まれていないと (できれば) 想定できます (したがって、滅菌が必要なのは針のみです)。 LC を瓶に接種する場合は、圧力鍋で使用する前に、上記の手順に従ってシリンジを滅菌する必要があります。マスター LC ジャーと滅菌したばかりの LC ジャーの表面全体を消毒し、注入ポートを拭くように特に注意してください。
接種の際は注射器や針をアルコールで拭いてください。アルコールが完全に蒸発するのを待ってから、針の先端が赤く光るまで火をつけます。針が冷めるまで 10 ～ 15 秒待つか、アルコールの入った小さな皿に針先を浸します。マスター LC ジャーの注入ポートを拭き、回転させて菌糸体を分散させ、すぐに針を挿入します。
LC ジャーを傾けて (フィルター パッチを 12 時の位置に保ちます)、シリンジに液体を吸い込み始めます。詰まった場合は、液体を瓶に注ぎ戻すだけで詰まりが解消されます。シリンジがいっぱいになったら、すぐに取り外して注入口を拭きます。新しい LC ジャーの注入ポートを拭き、新しく装填したシリンジの針を素早く挿入します。液体を数滴垂らし、針を取り外します。注入口を再度拭きます。
穀物スポーンの接種
圧力鍋で滅菌した後、穀物瓶が冷めたら、注入口を拭くように細心の注意を払いながら、穀物スポーン瓶の表面全体を消毒します。 LC シリンジは使用前に滅菌し、シリンジと針をアルコールで拭きます。アルコールが完全に蒸発するのを待ってから、針の先端が赤く光るまで火をつけます。針が冷めるまで 10 ～ 15 秒待つか、アルコールの入った小さな皿に針先を浸します。
穀物スポーンジャーの注入ポートをアルコールで拭き、ニードルを完全に挿入し、1.5 ～ 3 ml の LC を注入します。ニードルを取り外した後は、必ず注入ポートを拭いて汚染物質を引き寄せる可能性のある残留物を取り除き、ジャーの内容物を振って LC を分散させます。あるいは、針をジャーの側面に向けて、ジャーの 4 つ分のそれぞれに約 0.5 ～ 1 ml の液体を噴射します (ジャーあたり 2 ～ 4 ml の LC を使用)。
穀物に瓶の代わりに栽培バッグを使用する場合は、無菌プロトコール（隙間風がないことを確認、IPAで表面を拭く、綿棒で拭く、注射針の炎を燃やす）に従って、同様のアプローチを使用できます。ただし、一部の栽培者は、事前にバッグ接種を行うことを推奨しています。層流フードの場合、このアプローチは屋外で使用されており、私の経験では一貫した結果が得られ、注入するバッグの部分の汚染レベルは非常に低かったです。 IPA を燃やし、注射針を拭いてバッグに 5 ～ 10 ml の LC を注入すると、コロニー形成時間が短縮されますが、過剰な LC は穀物基質を過剰に湿らせる可能性があり、菌糸体はこれを認識しません。セロテープを数枚用意し、注射針がまだ炎で熱いうちに LC を注入し、注射針を引き抜き、すぐにシールします。次に、バッグの内容物をかき混ぜて LC を穀物に混ぜ込み、均一なコロニー形成を促進し、室温でインキュベートします (またはコロニー形成を促進するには 70 ～ 80°F)。
液体培養のインキュベーション
コロニー形成時間を短縮したい場合は、瓶を室温または華氏 70 ～ 80 度でインキュベートします。菌糸体の凝集を防ぎ、LC への酸素供給を助けるために、少なくとも 2 日に 1 回、LC ジャーを回転または振ってください (これは接種後の最初の 5 日間は必要ありません)。液体の約 60% を占める大きなゼリー状の菌糸体の塊ができたら (接種後約 1 ～ 2 週間)、冷蔵庫に保管します。ほとんどの場合、接種後約 2 週間で、新しいバッチの LC が十分に定着して接種を開始できるはずです。菌糸体が成長し、瓶がほぼいっぱいになったら、液体培養物を激しく撹拌して、菌糸体をできるだけ細かく砕きます。室温では、定着した LC は LC 栄養素が使い果たされるまで 6 か月間生存能力を維持できますが、冷蔵保存した場合は最大 2 年間生存能力を維持でき、何度でも使用できます。
成長の兆候を確認し、進行状況を監視するために、文化を定期的に観察してください。健康な菌糸体は、懸濁液中に浮遊する菌糸体のきれいな白い塊として現れます。 LC で汚染を見つけるのは必ずしも簡単ではありませんが、目に見える場合もあります。 LC 液が白濁したり、色が変化して透けにくくなった場合（接種後 1 週間程度で白濁が薄れる場合もありますのでご判断ください）、または塗布後に表面に緑っぽいアクの層が残っている場合数日間放置しておくか、液体から異臭がする場合は汚染されているため、廃棄する必要があります。
使用済みの注射器/針の滅菌
穀物のスポーンを孵化させる
穀粒スポーンは室温でインキュベートできますが、70 ～ 80°F の温度ではコロニー形成時間が短縮されます。玄米、全粒オート麦、ライ麦、小麦、全粒大麦、全粒キビ、野鳥の種子など、さまざまな穀物を使用できます。液体培養物を接種した後、ガラスの隣に見える粒の約 15 ～ 20% を覆う菌糸体の縞が見えるまで待ち、その後、瓶をよく振って接種した粒を瓶全体に均一に分散させます。これには約 4 ～ 6 日かかります。あるいは、液体培養物を接種した直後に瓶を振ってもよいでしょう。
寒天上での LC のテスト
オプションの中間ステップでは、寒天上で LC の無菌性をテストします。これにより、汚染がより明確にわかります。瓶の中に寒天を作り（以下に挙げる材料をコンロ上の鍋で軽く混ぜます）、混合物がとろとろのグレービーソース程度の粘稠度になったら、これを瓶に加えます（1/8 インチから 1/4 インチ） 』は深いです）。圧力鍋で15 PSIで20分間滅菌します。グローブ ボックスや層流フードの前などの無菌環境での滅菌手順を使用して、瓶を密閉してインキュベートする前に、寒天上に LC を数滴滴下します。
寒天のレシピ:
- 水50ml
- 粉寒天 1g
- ライトモルトエキスパウダー 1g（またはシロップ1mlを使用）
Reference :
